ELISA（酵素免疫測定法，Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay）で，吸光度データをマイクロプレートリーダーで取得した後は解析を行います。
段階希釈したスタンダードの吸光度（O.D.）から標準曲線（検量線，スタンダードカーブ，Standard Curve）を作成して，サンプルの濃度を求めます。
標準曲線の作成とサンプル濃度の計算はマイクロプレートリーダー付属のソフトウェアで自動的に行ってくれることも多いですが，ソフトウェアが最新OSに対応していなかったり，古めのマイクロプレートリーダーを使用している場合には，自分でデータをExcelなどのソフトに入力して標準曲線を作る必要があります。
標準曲線（検量線）の作り方の種類
標準曲線（検量線）の作り方は
- 線形近似（Linear）
- 4パラメーターロジスティック曲線（4 parameter logistic curve）
- 5パラメーターロジスティック曲線（4 parameter logistic curve）
などがあります。
どの方法を取るかは様々な考え方がありますが，ELISAにおいては，「4パラメーターロジスティック曲線（4 parameter logistic curve）」の使用が推奨されていることが多いです。
4パラメーターロジスティック（4PL）曲線とは？
4パラメーターロジスティック（4PL）曲線 とは，4つのパラメーター（a, b, c, d）を用いて下記の式で求められるシグモイド曲線です。
画像のキャプションに書いてある各パラメーターのことを読んでも，統計に詳しい人でなければおそらくピンと来ないと思います。そしてこの時点でアレルギーが出る人も・・・。
ただ，ここではこの数式について詳しく知る必要は無く，標準曲線から濃度が求められれば良いので，説明は省略します。
とにかく，この数式から4PL曲線を作ることになります。さてどうやって作りますか？エクセルにしますか？
4PL曲線はエクセル（Excel）で作れないの？
結論から言えば，「可能」です。
ただし，これをするにはエクセルの「ソルバー」機能に精通している必要があります。それでも結構複雑で，おそらく初心者の方には難易度が高いでしょう・・・。
オンラインツールで4PL曲線を「楽に」作ろう！
エクセルで作るのが難しいのであれば，どうしたらよいのでしょう？
なんと，今はオンラインで4PL曲線が楽に作成できて，データも求められるのです！
それでは，ここからは4PL曲線を作成できるオンラインツールをご紹介します。
※ 得られたデータの正確性につきましては，各自のご責任の下でご利用ください。
GainData ® (arigo Biolaboratories社）
高品質な抗体，リコンビナントタンパク質，ELISAキットを販売する，arigo Biolaboratories社（日本国内代理店：フナコシ株式会社）が提供するオンラインツールが，GainData®。
グラフィカルなユーザーインターフェース（UI）で直感的に使用でき，WordやExcel，CSV形式の生データから数値をペーストしてデータを求めることが可能。使用方法の動画もあり，初心者にも安心。
さらにエクセルやPDFでデータを出力することもでき，便利。なおPDFデータには4PL曲線が表示されるがエクセルデータには表示されないので注意。
特筆すべき点としては，4PLだけでなく5PLと線形近似にも対応していること。
登録不要，無料で使用できるツールとしては最高の完成度。
リンクはこちら：GainData ELISA data calculator | free ELISA data analyzer -arigobio – arigo Biolaboratories
Image and Video : arigo Biolaboratories
Four Parameter Logistic (4PL) Curve Calculator (AAT Bioquest社）
多くの蛍光プローブ，アッセイキットを扱うAAT Bioquest社（日本国内代理店：コスモ・バイオ株式会社，ナカライテスク株式会社）が提供するのが，Four Parameter Logistic (4PL) Curve Calculator (AAT Bioquest社）。
「How to use this tool」に書かれている通りにエクセルでデータを作り，「Data Entry」ペーストして進めていくだけでデータとグラフが作成できる。
できあがったデータの他フォーマットへの出力機能は無い様子。
リンクはこちら：Four Parameter Logistic (4PL) Curve Calculator | AAT Bioquest
MyAssays (MyAssays社）
NASAやMIT，CDCといった錚々たるクライアントを抱え，著名なキットメーカーからも推薦されている「MyAssays」。オンライン版とデスクトップ版がある。今のところ，オンライン版は無料で使用できる。デスクトップ版は有料。
グラフィカルなユーザーインターフェースで，4PLだけでなく5PLにも対応。希釈係数の考慮もでき，エクセルへの出力も可能。なおエクセルデータにも4PL曲線が表示される。
ただし，オンライン版使用にあたっては（現在のところ）無料の登録が必要。提供するのはメールアドレス，およびログイン用に設定するパスワード程度だが，提供に抵抗がある人には向かないだろう。
リンクはこちら：MyAssays – Data Analysis Tools and Services for Bioassays
まとめ
いかがでしたでしょうか。
自分でエクセルを操作し自動計算ツールを作るよりは，これらオンラインツールを使えば簡単にデータを求めることができます。
おそらく，今回ご紹介した中では arigo Biolaboratories社 の GainData® が最も使いやすいでしょう。
このツールを使用して，データの解析をよりスピーディーに完結させてみてはいかがでしょうか。
それでは。
